細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)在醫(yī)療器械和注射藥物的安全評(píng)估中占據(jù)核心地位，特別是針對(duì)革蘭氏陰性細(xì)菌釋放的高熱原性內(nèi)毒素。傳統(tǒng)上，這一檢測(cè)依賴于天然鱟試劑LAL，但近年來，隨著對(duì)可持續(xù)性和性能優(yōu)化的追求，重組級(jí)聯(lián)試劑（rCR）PyroSmart NextGen®逐漸嶄露頭角，成為備受矚目的替代選擇。

一、背景與目的

PyroSmart NextGen®重組鱟試劑是一種基于鱟基因克隆技術(shù)開發(fā)的重組級(jí)聯(lián)試劑（rCR），旨在提升對(duì)特定內(nèi)毒素的反應(yīng)性，并減少外部干擾。

本研究旨在全面評(píng)估PyroSmart NextGen®重組鱟試劑與LAL試劑在細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)中的等效性，并驗(yàn)證其在平板讀數(shù)器和試管讀數(shù)器方法中的性能表現(xiàn)。

二、分析性能驗(yàn)證

根據(jù)ICH Q2指南和USP<1225>標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)PyroSmart NextGen®重組鱟試劑在試管讀數(shù)器中的性能進(jìn)行了全面評(píng)估，結(jié)果顯示其在準(zhǔn)確度、精確度、特異性、定量限（確定為0.001EU/mL，試劑靈敏度相較于平板讀數(shù)器檢測(cè)法提高了5倍）、線性和范圍等關(guān)鍵參數(shù)上均符合驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)（表1）。

這些分析測(cè)試結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了PyroSmart NextGen®重組鱟試劑作為LAL試劑替代品的分析性能和適用性。

三、等效性測(cè)試驗(yàn)證

采用平板讀數(shù)器和試管讀數(shù)器方法，使用PyroSmart NextGen®重組鱟試劑和兩種LAL試劑對(duì)100多個(gè)過濾水樣進(jìn)行等效性測(cè)試。通過相對(duì)回收率、線性回歸分析和Bland-Altman圖等方法，評(píng)估兩種試劑之間的等效性。

●相對(duì)回收率：在測(cè)試的102個(gè)樣本中，91%的平板讀數(shù)器樣品和80%的試管讀數(shù)器樣品的相對(duì)回收率結(jié)果在50–200%之間（圖1），符合美國藥典最大試劑變異率的標(biāo)準(zhǔn)。

●線性回歸分析：對(duì)平板讀數(shù)器與試管讀數(shù)器檢測(cè)的樣品分別進(jìn)行線性回歸比較后，發(fā)現(xiàn)平板讀數(shù)器的線性回歸斜率為0.9873，95%置信區(qū)間為0.8779至1.097；而試管讀數(shù)器的斜率為1.073，置信區(qū)間為0.9769至1.170。

兩個(gè)讀數(shù)器的斜率均在0.7至1.3的范圍內(nèi)（圖2），進(jìn)一步證實(shí)了PyroSmart NextGen®重組鱟試劑與LAL試劑在檢測(cè)水樣內(nèi)毒素方面的等效性。

●Bland-Altman圖：在圖3所示的Bland-Altman圖中，平板讀數(shù)器檢測(cè)的偏差為-21.43，試管讀數(shù)器的偏差為-64.58，但兩者均有97%的數(shù)據(jù)點(diǎn)落在95%的一致性上限和下限（LOA）范圍內(nèi)。

根據(jù)證明等效性的標(biāo)準(zhǔn)，即至少95%的數(shù)據(jù)點(diǎn)應(yīng)位于此區(qū)間內(nèi)，PyroSmart NextGen®重組鱟試劑與LAL試劑在平板讀數(shù)器和試管讀數(shù)器方法上的比較均達(dá)到了等效性的要求。

四、替代試劑開發(fā)與實(shí)施的關(guān)鍵考量因素

本研究還強(qiáng)調(diào)了替代試劑在開發(fā)和實(shí)施過程中需要考慮的關(guān)鍵因素，如產(chǎn)品質(zhì)量、風(fēng)險(xiǎn)管理、生產(chǎn)質(zhì)量管理體系等。這些因素對(duì)于確保替代試劑的可靠性、穩(wěn)定性和可持續(xù)性至關(guān)重要。

五、結(jié)論

PyroSmart NextGen®重組鱟試劑作為一種重組級(jí)聯(lián)試劑（rCR），在細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)中表現(xiàn)出與LAL試劑相當(dāng)?shù)臋z測(cè)性能。其靈敏度更高，且能與多種LAL試劑進(jìn)行等效分析。

這些結(jié)果充分證明了PyroSmart NextGen®重組鱟試劑符合美國藥典通用通告和要求6.30以及美國食品藥品監(jiān)督管理局工業(yè)指南對(duì)替代檢測(cè)方法的要求，是替代LAL試劑的理想選擇。